车讯:换LOGO/续航100km 唐100明年一季度上市
RNáza (té? ribonukleáza) je enzym ze skupiny nukleáz, ktery ?těpí ?etězce ribonukleové kyseliny (RNA). Umo?ňuje hydrolytické ?těpení fosfodiesterové vazby v RNA.[1] Byla popsána celá ?ada RNáz s r?znymi vlastnostmi, několik z nich se pou?ívá v laborato?i. RNázy jsou obvykle proteinové povahy, pouze RNáza P je ribozym.[1] Dají se rozdělit na exoribonukleázy, které ?těpí od volného 5' nebo 3' konce, a endoribonukleázy, které ?těpí uvnit? molekul.[1]
Funkce
[editovat | editovat zdroj]RNázy plní v tělech organism? ?iroké spektrum funkcí. Nap?. RNáza A je trávicí enzym p?ítomny v pankreatické ??ávě, ktery umo?ňuje rozklad ribonukleovych kyselin p?ítomnych v potravě.[2] V buňkách se spousta RNáz podílí na sest?ihu pre-rRNA (u bakterií celá plejáda enzym?, jako je RNáza III, RNáza P, RNáza E, RNáza F, RNáza D, M16, M23 a M5). Podobné RNázy se uplatňují i ve vyrobě tRNA. RNáza L se ú?astní interferonové imunitní odpovědi; po aktivaci této RNázy dojde k degradaci ve?keré buně?né mRNA, co? zastaví ve?kerou syntézu bílkovin. RNázy H ?těpí RNA v DNA/RNA duplexech, tuto aktivitu má mimo jiné retrovirální reverzní transkriptáza.[2]
Pou?ití v laborato?i
[editovat | editovat zdroj]Na trhu je celá ?ada RNáz. RNáza A (izolovaná nap?. z hovězího pankreatu) se pou?ívá k odstranění RNA balastu p?i izolaci DNA nebo p?i jiné práci s DNA, ?i k tzv. ribonuclease protection assay. RNáza I a RNáza T1 mají podobné pou?ití. RNáza H umo?ňuje degradaci RNA v DNA/RNA hybridních duplexech (nap?. po prvním kroku reverzní transkripce nebo poté, co byla na speciální úsek RNA p?ipevněna nějaká sonda).[3]
Obrana p?ed RNázami
[editovat | editovat zdroj]RNázy jsou v?udyp?ítomné – nachází se na v?em, co p?ichází do kontaktu s prost?edím: jsou na pylovych zrnech, v prachu i na mastné stopě po otisku prstu.[4] Jsou navíc velmi odolné, mohou proto kazit vysledky laboratorních experiment?, p?i nich? se pracuje s RNA. Proto se v RNA laborato?ích dodr?uje celá ?ada preventivních opat?ení proti RNázám. Pro práci s RNA se vy?leňuje speciální sada automatickych pipet, které se pro jiné ?innosti nepou?ívají. Stejné pravidlo platí i pro chemikálie, pufry, laboratorní sklo a ná?iní na elektroforézu, které se v RNA experimentech pou?ívají. V?echny chemikálie se obvykle rozdělují do malych alikvot?, aby nebylo nutno je opakovaně otevírat a zavírat (co? by zvy?ovalo riziko kontaminace RNázami). Do vody pro práci s RNA se p?idává DEPC (diethylpyrokarbonát), jen? deaktivuje RNázy. Mnohdy se nasazují i dal?í inhibitory RNáz. Nádobí nesta?í jen autoklávovat, je vhodné oh?át ho na 300 °C po dobu a? 4 hodin. V?echno plastové jednorázové nádobí musí byt p?ísně ?isté a certifikované pro práci s RNA.[5]
Reference
[editovat | editovat zdroj]- ↑ a b c Oxford dictionary of biochemistry and molecular biology; revised edition. P?íprava vydání R. Cammack et al. New York: Oxford university press, 2006. ISBN 0-19-852917-1.
- ↑ a b VOET, Donald; VOET, Judith. Biochemistry. 4. vyd. [s.l.]: John Wiley & Sons, 1990. Dostupné online. ISBN 978-0470-57095-1.
- ↑ Products - Nucleases [online]. Thermo Scientific [cit. 2025-08-07]. Dostupné v archivu po?ízeném dne 2025-08-07.
- ↑ SCHEIN, Catherine H. Nuclease methods and protocols. [s.l.]: Humana Press, 2001.
- ↑ SAMBROOK, Joseph; RUSSELL, David W. Molecular Cloning - A Laboratory Manual. 3. vyd. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. ISBN 0-87969-576-5.
Externí odkazy
[editovat | editovat zdroj]
Obrázky, zvuky ?i videa k tématu RNáza na Wikimedia Commons